核酸染料

配置琼脂糖疑胶时，加入核酸染料溶解至60℃，一般为1%，如0.15克琼脂糖，加入15mlTAE，一般多一点。加入2ul核酸染料。

核酸染料的作用是与链融合，有助于显像，方便我们在凝胶成像设备下观看杂带。

倒琼脂糖疑胶时，注意插槽、方位，无气泡。

现在常见的核酸染料有哪些？

常见的核酸染料有：

1.EB染剂

EB是一种核酸分子置入剂，通常用于分子遗传学、DNA和染色质结构特征的研究，特别是许多国内实验室仍在使用EB进行疑胶核酸电泳实验。

EB是一种容易渗入细胞质和细胞内DNA嵌合的小分子，具有平面共轭大环结构，是典型的DNA

分子插入试剂，菲啶环插入DNA分子的碱基对，与DNA嵌合产生稳定的复合物，影响DNA

复制，破坏正常的遗传生理现象。EB作为一种诱变化合物，其诱导人体突变的机制是不可避免的。

2.Goldview染料

GoldView(GV)是一种可替代的溴化乙锭（EB）新型核酸染料的灵敏度与EB非常一致，操作方法完全一致。双链DNA在紫外线透射光下显示绿色荧光，也可用于RNA着色。

事实上，所谓的Goldview就是AO，也就是传说中的AO。有一种传统的细胞坏死实验。染料是AO/EB着色实验。EB不能通过完整的细胞质，而AO可以通过细胞质染上细胞核来划分凋亡和未凋亡的细胞。

3.GelRed 和 GelGreen染料

GelRed

和GelGreen

它是两种高灵敏度、低毒性和超稳定性的优良闪光核酸可疑胶着色试剂。根据美国环保局的安全认定，其水溶性着色剂可直接倒入下水道，不会造成任何环境污染。

GelRed

和 GelGreen

其独特的化学结构使其无法通过细胞膜进入细胞，正是这一特性降低了染料的细胞毒性。但正因为如此，它的价格大约是GoldView的十倍。

拓展材料

核酸染料的科研应用:

1.免疫分析

荧光标记的单克隆抗体技术是流式细胞仪，扩大了细胞质和细胞中各种功能抗原和肿瘤基因蛋白的无限应用空间。

荧光探针可以通过蛋白质交联剂在单克隆抗体上结合。异硫氰酸荧光素是免疫荧光识别中最常用的染料。(fluorescein isothiocyanate, FITC)、藻红蛋白（PE）以及AlexaFluor系列染料等。

2.病毒检测

核酸荧光染料定量测量细胞核染色后的荧光强度，确定细胞核中DNA、RNA含量，并能分析细胞周期和细胞增殖。

细胞中有多种荧光染料可以着色DNA或RNA，常见的DNA染料包括碘化丙啶(PI)、DAPI、Hoechst 3342等，RNA染料包括噻唑橙、阿啶橙等。

参考资料来源：百科全书-荧光染料

加热核酸染料会失效吗？

不会无效。

常见的核酸染料有：

1.EB(溴化乙锭)是一种高度敏感的嵌入式芳香族莹光化合物，是一种强致癌诱变剂，但价格便宜，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的核酸。

2.GoldView I型/II型染剂是一种可替代溴化乙锭（EB）新型核酸染料的灵敏度与EB非常一致，操作方法完全一致。双链DNA在紫外线透射光下显示绿色荧光，也可用于RNA着色。

3.GelRed和GelGren属于大分子商品，经埃姆斯斯斯之后， AMS 结果表明，染料的诱变性远小于溴化乙锭（EB），是两种集高灵敏度、低毒性、超稳定性于一体的优良莹光核酸疑胶着色试剂。

4.SYBR Green 和SYBR Gold于1995 年由 Molecular probes 公司发布，是一种高灵敏度的核酸染料，稳定性差。

比较几种核酸染料

1、EB(溴化乙锭)

溴化乙锭是一种高度敏感的嵌入式莹光着色剂，是一种强致癌诱变剂，但价格便宜。与DNA的融合基本上没有碱基序列。溴化乙锭分子每2.5个碱基插入一个高离子强度饱和溶液中。EB的特点使其成为一种核酸染料，常用于琼脂糖凝胶电泳中的核酸着色。溴化乙锭在紫外线区域的302nm和366nm上有吸收峰。在紫外线的照射下，溴化乙锭可以激发橙色的光（590nm）。与DNA融合的溴化乙锭复合物的荧光强度将是未与DNA融合的染料的20-30倍，因此溴化乙锭可检测到至少10ng的DNA杂带，非常敏感。

2、Gel Green和Gel Red

Biotium企业开发推出的EB替代染料的着色性能与EB相似，在紫外线下不易淬灭，可用于胶水回收。但是价格太贵了。

GelRed 和 GelGreen 它是一种结合高灵敏度、低毒性和超稳定性的优良闪光核酸可疑胶着色试剂。根据美国环保局的安全认定，其水溶性着色剂可直接倒入下水道，不会造成任何环境污染。其特点如下：

1)高灵敏度：GelRed 和 GelGreen 是目前市场上最敏感的疑胶核酸染料之一；

2)稳定性好：可用微波炉加热，可在常温下储存；

3)更安全:根据艾姆斯的实验结果，染料的诱变性远小于溴化乙锭（EB）；

4)适应性广：适用于预制疑胶和凝胶电泳后上色；

5）着色过程简单：与EB一样，在预制胶和电泳过程中不用担心染料降解；电泳后着色过程只需30分钟，无需褪色或清洗；

6）对 DNA 和 RNA 转移影响小:对核酸转移的影响小于 SYBR Green I?；

7)与标准凝胶成像系统及其可见光刺激的疑胶观察设备极为适应：应用 312nm 激发的 UV 在凝胶成像系统中，GelRed 它可以完美地取代EB；应用 254nm 激发的 UV 当凝胶成像系统或可见光刺激的疑胶观察设备时，GelGreen 取代任何一个就足够了 SYB染料。但这种染剂会使小片段DNA转移更慢(与EB相比).

3、绿色荧光核酸染料

绿色荧光核酸染料对大片段DNA有很好的着色效果，但对500bp以下的片段效果不是很好。另一个致命的弱点是，它的荧光基团在紫外线下很容易淬灭，5-10分钟的杂带通常会消失。此外，绿色荧光核酸染料不适合胶水回收。

4、SYBR Green 和SYBR Gold

稳定性差，也有毒。它属于花青素核酸染料，花青染料不是无毒的，而是微毒的，电泳等级是装饰的，有三种装饰：1。添加卤素或氰基。2.插入环羟基。3.添加增稠剂。SYBR Green I是一种高灵敏度的DNA荧光染料，适用于各种电泳分析，操作简单：无需褪色或清洗。至少可以检测到20pg DNA，比EB染色法高25-100倍。SYBR Green I 与dsDNA 融合莹光信号将提高800-1000倍，使用SYBR Green I染色的疑胶样品光线信号强，背景信号低。SYBR Green和SYBR 与EB相比，Gold的稳定性要差得多。SYBR系列染料还可以进入细胞染色线粒体及其核内的DNA，从而造成危害。SYBR Green I已被证实在紫外线下会产生强烈的诱变能力，使DNA或其他物质发生突变。

比较几种核酸染料

染剂 安全性 稳定性 灵敏 优点 缺陷

EB -- 廉价 强诱变剂

Gel Green 安全 价格贵

绿色荧光核酸染料 - - 大片段染色良好 易淬灭

SYBR Green - - 灵敏 稳定性差

核酸染料（Nucleic acid dye）

DNA染剂：碘化丙啶（PI）、DAPI

添加更多的核酸染料会影响电泳的结果吗？

会。 核酸着色用于许多与DNA检测相关的技术领域。着色剂与DNA的融合会导致电泳迟缓，增加更多也会影响电泳的结果。核酸染料是一种敏感、稳定、相对安全的光核酸着色试剂，是生物实验中不可缺少的一部分。

添加核酸染料后不融解

添加核酸染料后不融解是因为Gellred核酸染料是一种具有疑胶着色特性的高毒性着色剂，并被设计成更换－溴化乙锭（EB）红色莹光核酸着色剂。

可以使用GelRed核酸染料(precast gel staining)，也可用于后染(post gel staining)。一般来说，后染比前染更敏感，可以去除电泳时着色剂对核酸杂带分离的概率。然而，前染比后染更简单、更经济，因为前染不需要额外的着色过程，而且燃料消耗更少。因此，如果灵敏度和杂带清晰度不是问题，前染是首选。我们强烈建议您尝试两种染色方法，以便根据您应该选择最佳的染色方法。